導語：如何才能寫好一篇醫(yī)學檢驗常用染色方法，這就需要搜集整理更多的資料和文獻，歡迎閱讀由公務員之家整理的十篇范文，供你借鑒。

篇1

[關鍵詞] 抗酸桿菌；缸染法抗酸染色顯微鏡；檢查結果

[中圖分類號] R331 [文獻標識碼] A [文章編號] 1674-0742（2017）03（b）-0083-03

[Abstract] Objective To analyze the application effect of cylinder dyeing acid-fast stain microscopy method in examining the acid-fast bacilli results. Methods 100 cases of patients with tuberculosis admitted and treated in our unit from January 2008 to January 2016 were conveniently selected as the observation group， and 100 cases of patients with tuberculosis admitted and treated in our unit at the same period were selected as the control group， the control group were given the monolithic separated dyeing， while the observation group were given the monolithic immersion mixture dyeing， and the examine results were compared between the two groups. Results The difference in the test rate of acid-fast bacillus between the observation group and the control group had statistical significance by comparison （95.00%vs 80.00%）（P

[Key words] Acid-fast bacilli； Cylinder dyeing acid-fast stain microscopy； Examination results

Y核病是我國發(fā)病率極高的一種慢性傳染病，該病主要由結核桿菌感染而誘發(fā)，因此給予結核病患者應用一種可靠、操作簡單的篩選方法進行檢查意義重大[1-2]。在臨床上預防和診斷結核疾病的途徑主要是通過檢測結核桿菌及分析其病理而實施的，所以，如何科學有效地檢查出分支桿菌的細菌，準確迅速發(fā)現傳染源對于結核病患者的臨床診治具有十分重要的意義。缸染法抗酸染色顯微鏡方法是當前臨床檢查結核病常用的方法之一，該檢查方法查找患者痰液中的抗酸桿菌時，操作較簡單，并不需要使用昂貴的儀器設備，同時具有極強的特異性，臨床工作人員可以省去進一步確認的步驟，從而明顯提高結核病控制工作的質量[3-5]。為了分析抗酸桿菌應用缸染法抗酸染色顯微鏡方法進行檢查的結果，該文對2008年1月―2016年1月該單位收治的200例結核病患者作出研究，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

方便選擇該單位收治的100例結核病患者作為觀察組，其中男64例，女36例；年齡21～37歲，平均年齡（22.26±1.08）歲；病程0.1～3年，平均病程（1.02±0.27）年。同時將該單位同期收治的100例結核病患者設為對照組，其中男62例，女38例；年齡20～36歲，平均年齡（22.14±1.02）歲；病程0.2～3年，平均病程（1.06±0.25）年。兩組患者的一般資料經對比差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05），可進行對比。

1.2 方法

兩組患者在2周內已進行抗酸桿菌檢查，若患者檢查結果顯示為陽性，則均取1份痰液標本，每份痰液標本均作直接涂片6張，自然干燥后，固定放置在100 mL初染劑中進行染色，時間為5 min，然后取出4片使用自來水沖洗，用脫色劑脫色后，再用自來水沖洗，其中2片放置在100 mL脫色劑中，剩下2片則放置在100 mL復染劑中。上述涂片均各使用1張新玻片將其涂層盡量刮擦下來混入各染色組分中，并且當做當天的污染攻擊染液組分。其中對照組患者的標本直接涂片采取單片分置染色，觀察組患者的標本直接涂片采取單片浸入混合染色，模擬進行平行檢測。同時取兩組抗酸桿菌檢查結果為陰性者的痰標本直接涂片3份，主要當做污染法陰性無污染對照。

1.3 統(tǒng)計方法

選擇SPSS 19.0統(tǒng)計學軟件以及excel軟件分析兩組患者的全部數據資料，計數資料采用[n（%）]表示，采用χ2檢驗，以P

2 結果

2.1 兩組患者鏡檢結果對比

觀察組患者的抗酸桿菌檢出率為95.00%，對照組患者的抗酸桿菌檢出率為80%，將兩組患者的抗酸桿菌檢出率進行對比，發(fā)現觀察組明顯高于對照組，差異有統(tǒng)計學意義（P

2.2 兩組患者污染率對比

觀察組患者的抗酸桿菌檢查污染率為0.00%，對照組患者的抗酸桿菌檢查污染率為10.00%，將兩組患者的抗酸桿菌檢查污染率進行對比，發(fā)現觀察組明顯低于對照組，差異有統(tǒng)計學意義（P

3 討論

目前臨床檢查抗酸桿菌時，臨床標本直接涂片抗酸染色顯微鏡方法是應用范圍較廣的一種檢查方法，該檢查方法相對于熱染法來說，操作步驟更簡單，并且染液用量更少，同時還能對環(huán)境進行保護[6-9]。當前國內結核病控制對策中，通過痰涂片對抗酸桿菌進行的實驗方法是結核病控制工作人員找出傳染源的主要方法，該檢查方法設備并不復雜，操作難度低，同時可以快速獲取報告結果，具有極高的特異性[10-12]。但是直接涂片抗酸染色顯微鏡方法也存在部分缺點，比如敏感性不高，檢驗結果較容易受痰標本質量、留置時間以及臨床檢驗人員等因素的影響?；诖?，詳細分析缸染法抗酸染色顯微鏡方法的優(yōu)缺點，并制定對應措施，可直接關系到抗酸桿菌的臨床檢查結果[13-14]。

該研究結果顯示，觀察組抗酸桿菌檢出率95.00%，對照組抗酸桿菌檢出率80.00%，對比差異有統(tǒng)計學意義（P

綜上所述，抗酸桿菌檢驗過程中使用缸染法抗酸染色顯微鏡方法，污染發(fā)生率較低，保證檢查結果，值得推廣。

[參考文獻]

[1] 王華鈞，孫小軍，金法祥，等.4種結核分枝桿菌檢測方法的比較[J].中華醫(yī)院感染學雜志，2014，12（26）：1253-1254.

[2] 張小芬，劉平.抗酸染色冷染法和熱染法查找痰中結核桿菌效果比較[J]實用預防醫(yī)學，2013，17（10）：3101-3103.

[3] 王秀娥. 抗結核治療對組織中抗酸染色陽性率的影響[J]. 臨床醫(yī)藥實踐， 2016， 25（10）：797-798.

[4] 汪峻嶺，李照丹，徐興偉，等. PCR技術、抗酸染色法在肺結核病理學診斷中應用比較[J].中外醫(yī)療，2016，35（15）：77-78.

[5] 王霖， 王輝， 李才信，等. 熒光定量PCR技g在肺結核診斷中的應用研究[J]. 中國衛(wèi)生標準管理， 2016， 7（11）：169-171.

[6] 袁薇， 陳依江， 張銘，等. 兩種染色方法檢測抗酸桿菌的結果分析[J]. 貴州醫(yī)藥， 2011， 37（10）：935-937.

[7] 仝雪霞， 任飛， 孔海濤，等. 纖維支氣管鏡刷片對抗酸桿菌陽性肺結核患者的診斷價值[J].寧夏醫(yī)科大學學報， 2016， 38（2）：181-183.

[8] 阿斯艷，玉山. 探討痰涂片抗酸染色冷染法、熱染法的效果比較[J]. 醫(yī)藥前沿， 2016， 6（17）：67-68.

[9] 楊上英. 比較分析痰涂片及熒光定量PCR在診斷肺結核中的作用[J]. 中外醫(yī)療，2011，30（5）：3-4.

[10] 滕曉梅. 結核感染T細胞、結核抗體、抗酸染色3種方法的臨床評價[J].國際檢驗醫(yī)學雜志，2016，37（8）：1149-1150.

[11] 柳曉金， 張海叢， 許怡，等.改良抗酸染色法診斷盆腔結核意義分析[J]. 標記免疫分析與臨床， 2016， 23（3）：275-277.

[12] 李榮輝， 羅又瑋. 4種檢測方法在診斷結核病中的價值分析[J]. 臨床合理用藥雜志， 2016， 9（23）：96-98.

[13] 汪峻嶺， 李照丹， 徐興偉，等. PCR技術、抗酸染色法在肺結核病理學診斷中應用比較[J].中外醫(yī)療，2016，35（15）：77-78.

[14] 陳國麗. 兩種染色法在肺結核診斷中的對比性研究[J]. 安徽衛(wèi)生職業(yè)技術學院學報， 2016， 15（3）：165-166.

[15] 孫麗娜， 孫京濤， 田永全，等.缸染法抗酸染色顯微鏡方法檢查抗酸桿菌結果分析[J].中醫(yī)臨床研究，2015，7（8）：143-144.

[16] 吳紹男. 兩種抗酸染色法查麻風桿菌的比較[J].中國麻風皮膚病雜志， 2012， 28（12）：873-874.

[17] 鐘麗云.金胺O熒光染色聯(lián)合抗酸染色在結核病診斷中的應用價值[J]. 深圳中西醫(yī)結合雜志，2016，26（7）：23-24.

[18] 張梅.痰涂片和TB-DNA及血清抗PPD-IgG在肺結核感染診斷中的聯(lián)合應用[J].國際檢驗醫(yī)學雜志， 2016， 37（4）：504-505.

[19] 郭永博， 王靜， 張琳，等.改良抗酸染色法在結核性漿膜炎臨床診斷中的價值[J].醫(yī)學研究雜志， 2015， 44（8）：64-66.

[20] 尹春嶺， 周良銳， 劉洋.介紹一種改良的抗酸桿菌染色法[J]. 診斷病理學雜志，2016， 23（7）：554-555.

篇2

【關鍵詞】 兒童； 細菌耐藥監(jiān)測； 耐藥率

兒科臨床使用廣泛，而兒童可選擇的抗菌藥物品種有限，因此實時監(jiān)測病原菌種類的變遷及藥物敏感性變化，對兒科臨床合理選擇抗菌藥物有重要的指導意義?，F將某兒童醫(yī)院2012-2013年細菌微生物實驗室檢出病原菌和耐藥性進行回顧分析，報告如下。

1 材料與方法

1.1 菌株來源 2012-2013年各臨床科室送檢的各類陽性標本（痰液、血液、糞便、胸水、膿液、咽拭子、各類灌洗液等）中分離并進行藥敏試驗的病原菌株。標本送檢和保存參照《全國臨床檢驗操作規(guī)程》（第3版）。分析結果時剔除同一患者重復菌株，非無菌部位標本（如痰液）至收集感染標本菌株。

1.2 細菌培養(yǎng)、分離、鑒別及藥敏試驗 （1）標本接種和培養(yǎng)參照《全國臨床檢驗操作規(guī)程》（第3版）進行，細菌的鑒定采用PHOENIX 100型全自動微生物分析儀儀器，藥敏試驗采用PHOENIX 100型全自動微生物分析儀儀器配套的藥敏板，操作嚴格按照PHOENIX100說明書，同時結合手動監(jiān)測結果。（2）質控菌株：大腸埃希菌ATCC25922、金黃色葡萄球菌ATCC25923、銅綠假單胞菌ATCC27853均購置衛(wèi)生部。

1.3 統(tǒng)計學處理 用SPSS 19.0 統(tǒng)計學軟件對計數資料進行 字2檢驗，以P

2 結果

2.1 2012-2013年主要病原菌的檢出情況 近2年檢出主要病原菌的種類變化不大，2013年較2012年細菌總數有所增加，但各主要病原菌的比例下降，說明其他病原菌檢出增加。具體見表1。

2.2 主要抗菌藥物耐藥率的比較 主要革蘭染色陽性菌及陰性菌對各類抗菌藥物的耐藥率見表2～3。

2.3 銅綠假單胞菌對常用抗菌藥物耐藥性的比較 近2年銅綠假單胞菌對大部分抗菌藥物耐藥率升高明顯（P

3 討論

近2年檢出的兒童疾病病原菌主要為革蘭染色陰性菌，與文獻[1]報道一致。革蘭染色陰性細菌中以大腸埃希菌為主。表皮葡萄球菌在本院革蘭染色陽性菌中檢出率最高與陳婷等[2]檢測結果一致，提示過去認為是無致病性或弱致病性的菌株已經成為醫(yī)院感染中臨床多見的病原菌。

本院革蘭染色陽性菌耐藥率從高到低依次為溶血葡萄球菌、表皮葡萄球菌、金黃色葡萄球菌，這3種細菌對青霉素耐藥率均85%～95%，對紅霉素耐藥率均70%～90%；金黃色葡萄球菌對阿莫西林棒酸耐藥率由25.3%升高至57.3%，對苯唑西林耐藥率由15.2%下降至9.3%，以上數據與文獻[3-4]報道一致。未檢出對萬古霉素耐藥菌株。萬古霉素為糖肽類抗菌藥物，是臨床上治療耐甲氧西林葡萄球菌的最為經濟有效的藥物[5]，因此為防止和減緩耐萬古霉素的葡萄球菌的出現，將萬古霉素作為特殊限制級抗菌藥物使用有重要意義。

主要革蘭染色陰性桿菌對各類抗菌藥物耐藥率均有不同程度升高。大腸埃希菌、克雷伯菌對青霉素類、第一代、第二代頭孢菌素類抗菌藥物耐藥率均達75%以上，對三代頭孢菌素類頭孢曲松、頭孢哌酮、頭孢噻肟耐藥率也高達50%以上，對頭孢他啶、第四代頭孢菌素類耐藥率20%～30%，對加酶抑制劑哌拉西林他唑巴坦和頭孢哌酮舒巴坦的耐藥率升高，但

2013年銅綠假單胞菌對大部分抗菌藥物耐藥率較2012年升高明顯（P

參考文獻

[1]李玲，王剛，王荔，等.2007-2008年重慶兒童醫(yī)院細菌耐藥性監(jiān)測分析[J].中國醫(yī)院藥學雜志，2010，30（8）：685-687.

[2]陳婷，楊力，徐文君，等.新生兒葡萄球菌屬感染分布于耐藥性分析[J].中國實用兒科雜志，2014，29（1）：52-53.

[3]李耘，呂媛，薛峰，等.衛(wèi)生部全國細菌耐藥檢測網2011-2012年革蘭陽性菌耐藥監(jiān)測報告[J].中國臨床藥理學雜志，2014，30（3）：251-259.

[4]楊青，陳曉，孔海深，等.Mohnarin2010年度報告：0～14歲兒童細菌耐藥監(jiān)測[J].中華醫(yī)院感染學雜志，2012，22（3）：497-502.

[5]屈丹，梁進娟，劉育新，等.醫(yī)院多重耐藥菌感染的監(jiān)測及分析[J].中國醫(yī)學創(chuàng)新，2012，9（12）：147-148.

[6]肖永紅，沈萍，魏澤慶，等.Mohnarin2011年度全國細菌耐藥監(jiān)測[J].中華醫(yī)院感染學雜志，2012，22（22）：4946-4952.

[7]董懿珍.我院2009-2010年抗菌藥物使用與細菌耐藥性分析[J].中國藥房，2012，2（10）：905-907.

篇3

關鍵詞： 臨床微生物學 基本技術 實驗考核 方法 應用

醫(yī)學檢驗專業(yè)的學生畢業(yè)后大多從事醫(yī)學檢驗和實驗室工作，除了理論知識外，熟練的實驗操作和技能是他們立足的基礎。臨床微生物學檢驗是醫(yī)學檢驗專業(yè)的重要專業(yè)課，是一門實踐性和應用性均很強的學科。隨著感染性疾病類型的改變，新發(fā)和再發(fā)病原體的不斷增加，臨床微生物學在臨床檢驗工作中占據重要地位，并對培養(yǎng)合格的臨床微生物學檢驗的專業(yè)人才提出了更高要求［1］。另外，臨床微生物學接觸的多為病原微生物，必須樹立“有菌觀念”，保證“無菌操作”，充分掌握生物安全的相關知識，才能適應臨床和科研工作。因此，在臨床微生物學檢驗實驗教學中，教師必須高度重視對學生的基本實驗技能訓練和培養(yǎng)良好的實驗習慣，做到從頭從嚴抓起，使學生熟練掌握各項基本實驗技術，融會貫通，并加強探索和創(chuàng)新等科學素養(yǎng)的培養(yǎng)。

為提高教學質量，我們實行在完成微生物學基本技術教學后，對學生進行標準化實驗考核。多年的經驗顯示，對微生物學基本技術進行標準化考核，不僅可評價學生對基本技術的掌握程度，進一步規(guī)范基本技術操作，促進學生學習的主動性和積極性，而且是評價和提高教學質量、推進教學改革的有力依據。

一、臨床微生物學基本技術標準化實驗考核內容及考核目標

在臨床微生物學中，實驗基本技術重要包括顯微鏡使用、革蘭染色、培養(yǎng)基制備、消毒與滅菌、細菌分離與培養(yǎng)［2］。根據教學大綱和實際情況，我們選擇革蘭染色和分區(qū)劃線兩個項目作為實驗考核項目，并要求在20分鐘內完成操作并作出染色結果報告。其中革蘭染色主要檢查學生對革蘭染色技術的掌握情況，染色結果判斷和報告準確性，以及顯微鏡使用和維護；分區(qū)劃線除了考核學生對分區(qū)劃線技術的掌握情況外，還包括無菌操作、接種環(huán)使用、開/拿平皿及劃線的手法、實驗材料標記、清理臺面等實驗習慣的考核。

二、臨床微生物學基本技術標準化實驗考核方法

目前臨床微生物學實驗課都是小班教學，我院基本上是一個教師負責28―32名學生，每個年級由3―4位教師帶教。為避免教師個人習慣和師承的差異，在臨床微生物學實驗教學中實行規(guī)范化帶教，對教學內容、教學方法，以及實驗操作基本技術等方面均進行統(tǒng)一。這樣，可以有效避免因教師因素引起的差異，使標準化實驗考核能順利進行。

臨床微生物學基本技能標準化實驗考核，包括實驗考核組織、標準化操作方法、標準化監(jiān)考和記錄、標準化評分標準、修正和預防措施。具體方法和操作過程如下。

1.實驗考核組織

在實驗課的第一堂課，即告知學生要進行基本技術考核。在考核前1周，教研室統(tǒng)一對學生講解考核要求和紀律，考核內容及評分標準等文件?？记?天，實驗室準備好考核用玻片、試管架、接種環(huán)、記號筆、培養(yǎng)基、各種試劑、顯微鏡等材料和儀器?？记?天轉移考核用菌種，保證細菌處于對數生長期。教研室對參加考核的所有學生隨機安排考試地點和時間，考核名單及具體安排于考前1天張貼在實驗室門口，由非帶教老師擔任監(jiān)考老師。

2.標準化實驗考核內容

選擇金黃色葡萄球菌ATCC25923和大腸埃希菌ATCC25922作為考試用菌種。每個學生一個菌種，編寫不同號碼。要求在20分鐘內完成革蘭染色和分區(qū)劃線兩個項目操作，并作出染色結果報告。

3.標準化操作方法

嚴格無菌操作。革蘭染色包括做好標記，正確制片；自然干燥；火焰固定；結晶紫初染，盧戈碘液媒染，95%酒精脫色，稀釋石碳酸復紅復染；吸水紙吸干；油鏡觀察；結果報告；油鏡和玻片清洗；臺面整理。分區(qū)劃線包括標記，劃線的姿勢；平皿打開的手法，平皿放置；平皿開口朝向；劃線分布；放培養(yǎng)箱培養(yǎng)。

4.標準化監(jiān)考和記錄

按照考核安排表，學生在規(guī)定時間和地點進行操作并報告結果，每位教師在每個時間段負責3―4名學生，對學生的每一個操作進行監(jiān)督并記錄，當學生在油鏡下找到細菌后，監(jiān)考教師檢查染色結果并記錄。學生在記錄單上填寫染色結果報告并簽名。加強考場紀律，用計時器提醒學生。教師不回答學生任何與考核有關的問題。

5.標準化評分標準

實驗考核成績以20分計，直接計入課程總成績。分數分配如下。

（1）革蘭染色技術9分。標記0.5分；制片1分；固定1分；染色步驟2分（結晶紫初染，盧戈碘液媒染，95%酒精脫色，稀釋石碳酸復紅復染每個步驟各0.5分）；染色結果正確1分；報告正確1分；顯微鏡使用和維護2分；玻片清洗及臺面清理0.5分。

（2）分區(qū)劃線9分。平皿底部標記0.5分；平皿放置0.5分；無菌操作2分（接種環(huán)滅菌及冷卻、平皿開口朝向、單手開平皿、酒精燈正確使用各0.5分），劃線姿勢和手法1分；送培養(yǎng)箱培養(yǎng)1分；劃線分布2分；分離結果2分（劃線分布和分離結果由老師在培養(yǎng)后第二天評分）。

（3）其他2分。在規(guī)定時間20分鐘內按要求完成所有操作。超時1分鐘扣0.5分，超時2分鐘扣1分，超時3分鐘扣2分，超時4分鐘扣3分，超時5分鐘扣5分。超過5分鐘未完成操作，參加補考。補考以總成績?yōu)?8分計，通過者實驗考核成績?yōu)?2分。

6.修正和預防措施

對不會用顯微鏡（包括油鏡下找不到視野，不會使用油鏡等），結果報告錯誤（與鏡下結果不符，如球菌報告為桿菌，紅色報告為革蘭陽性等）的學生，無論前面各項操作結果如何，一律重考。

考核結束后，進行分析并做總結。除了對學生考核成績進行分析外，還特別注意在考核過程中出現的各種問題，并針對考核中常見的特殊性問題，在實驗教學中加以改進和提高。

三、標準化實驗考核應用體會

臨床微生物學基本技術實驗考核是以教學大綱為質量標準的考試，目的是檢驗學生是否達到教學大綱要求和學業(yè)成績的差異。主要考核學生對常用臨床微生物學實驗技能的掌握程度。實驗考核結果不僅可評價學生對臨床微生物學知識和技術的掌握程度，而且是評價教師教學質量的有力依據。

對醫(yī)學檢驗專業(yè)學生，我們一直非常重視他們的臨床微生物學基本技能訓練，在教學中做到以小組為單位，由帶教教師講解并進行操作示教。在學生自己操作過程中，教師在實驗室內巡回，仔細觀察學生操作，對不規(guī)范和錯誤的操作及時糾正，下課前總結并提醒學生在試驗中出現的問題。由于學生普遍對醫(yī)學檢驗檢驗專業(yè)和臨床微生物學的認識，加上學生均知道要進行操作技術考核，絕大部分學生在實驗過程中能做到較積極主動地學習。

自2005年開始建立標準化實驗考核體系，2006年開始實踐以來，我們發(fā)現建立和應用標準化的實驗考核體系，一方面可更好地促進學生的學習積極性：實施標準化考核以來，學生對基本技術的重視較以往明顯提高，每次實驗中都認真操作，完全不需要教師像以前一樣進行檢查，真正做到自覺、認真，甚至有部分學生利用課余時間聯(lián)系實驗室進行強化聯(lián)系。另一方面可使實驗考核規(guī)范化，做到有據可依的評分，避免人為因素等諸多可變因素對學生成績的影響，做到有據可依、客觀、合理、公正地評價和評分。另外，由非帶教教師進行監(jiān)考和評分，避免了因帶教教師個人喜好等因素影響學生成績，也可進一步促進實驗帶教的規(guī)范化。

總之，與以前的實驗考核比較，標準化實驗考核體系不僅能進一步促進學生的學習積極性和獨立解決問題的能力，標準化的評分標準使學生在完成考核后對自己的成績已經心中有數，避免少數學生對自己成績有意見的現象，而且能促進學生在操作過程中養(yǎng)成良好習慣。臨床微生物學基本技術標準化實驗考核是公正、客觀考核學生學習效果、評價教學質量的重要手段。

參考文獻：

［1］王躍，程曦，王頻佳.臨床檢驗微生物學課程體系改革的探索［J］.現代預防醫(yī)學，2011，38（1）：73-74.

篇4

【關鍵詞】TF染色法；快速診斷；治療；淋菌性眼炎

文章編號：1009-5519（2007）19-2866-02 中圖分類號：R77 文獻標識碼：A

Fast diagnosis and treatment of gonococcal ophthalmia in newborn

YU Qiang

(The Maternal and Child Health Hospital of Hongan,Hubei 438400,China)

【Abstract】Objective:To introduce a fast diagnostic way of gonococcal ophthalmia in newborn,ie,TF staining method.Methods:The eye secretion was collected from 25 newborns who were out-and in-patients with much eye secretion and smeared respectively.These smears were stained with TF staining method,and then looked for gonococcus under microscope.The illegimate sexual act of parents and some related sanitations were investigated respectively at the same time.Results:Five of 25 newborns were diagnosed as gonococcal ophthalmia,which agreed with the illegimate sexual act of their parents(unilateral father or mother or both father and mother).The sick newborns with gonococcal ophthalmia were treated in time,and all were cured and discharge.Conclusion:Combined with the related illness of parents(especially illegimate sexual act),the TF staining method could rapidly examine gonococcus in eye secretion of newborn.So it is suggested that the TF staining method possessed a stronger utilized value in the diagnosis of gonococcal ophthalmia in newborn.

【Key words】TF staining method；Fast diagnosis；Treatment；Gonococcal ophthalmia

淋病是最常見的性病之一，在小兒淋病中以新生兒淋菌性眼炎和淋菌性外陰陰道炎較多見，尤其是孕婦感染淋球菌后，增加了母嬰傳播的機會，可因分娩將產道的淋菌直接傳染給所生的新生兒，引起眼炎。表現為眼分泌物增多并呈膿性外觀，眼結膜充血、水腫，不易睜眼。由于淋球菌培養(yǎng)時間較長，而用涂片檢查，方法簡便、有效并有一定的特異性[1]；為探討一種新的淋菌涂片快速染色方法，特選用了喻強建立的用途廣泛的TF染色法[2～5]，先后對25例有眼分泌物增多的新生兒做淋菌染色檢查，共檢出5例，并結合患兒家長的病史（均有婚外）將5例診斷為新生兒淋菌性眼炎，現予介紹。

1 資料和方法

1.1 臨床病例：先后選擇25例眼分泌物增多的新生兒，其中門診就診16例，住院患兒9例（剖宮產2例，自然分娩7例），其日齡均在3～22天之間。

1.2 染色液的配制：選用TFM液[2]的配制方法，配制后置一尖嘴的塑料小瓶中保存（容量在10～15 ml即可），放置時間長時應注意及時校正或更換。

1.3 染色步驟：用無菌棉簽浸入生理鹽水后再采取新生兒眼分泌物，涂片后待干，滴加1～3滴TFM液，染數秒鐘（待染液稍轉紅即可），背面式沖片，待干（背式烘干也可，但溫度不宜高），中性樹膠封片再置顯微鏡下觀察。

2 結果

經TF染色后的標本，細胞著色鮮明，淋菌染成淡藍色，有時稍偏紫，有些細胞內含10余對至幾十余對雙球菌，兩菌接觸面平坦或稍凹，呈腎形或卵圓形（菌體的大小與形態(tài)符合淋菌的特征）；在受檢的25例標本中，檢出5例淋菌標本（其中門診1例，住院4例），為了對照研究，又將這5例眼分泌物拭子再次涂片，用革蘭染色，結果均檢出革蘭陰性細胞內雙球菌，同時結合該5例患兒的家長病史（均有婚外），將這5例診斷為新生兒淋菌性眼炎，并及時給予了治療，均治愈出院。

3 討論

淋菌對人體的黏膜有特殊的親和力，即使完整的黏膜也可發(fā)生感染，孕婦患淋病后，新生兒于產道分娩時易感染淋菌性眼炎，如不及時診斷和治療則會導致失明。輕癥或無癥狀的淋病患者是重要的傳染源，有資料表明，臨床上有5%～20%的男性和60%的女性感染后無明顯癥狀，由于新生兒淋菌性眼炎可擴散發(fā)展，如膿尿、咽炎、頭皮化膿、敗血癥、圣克萊爾病和播散性淋球菌感染[7]，因此當新生兒在生后48小時出現眼分泌物多，呈膿性外觀，眼結膜充血、水腫時應引起高度注意，有條件的單位可取兩份標本，一份快速染色檢查，一份做細菌培養(yǎng)。有文獻提示[6]，在取分泌物標本到實驗室培養(yǎng)之后開始憑經驗治療，而不是等待結果。

在染色檢查中，一般常用革蘭染色或美藍染色，急性淋病的診斷標準為見到“細胞內革蘭陰性雙球菌”，而膿細胞中?？珊?至數對，當典型的細胞內革蘭陰性雙球菌在分泌物涂片中找到時，也可初步診斷并進行治療。本研究之所以選用TF染色法，是因該法具有用途廣泛，操作簡便，可重復染色并且涂片中的有形成分著色鮮明等特點[6，7]，尤其是染色時間易掌握（只要滴在標本上的染液稍轉紅即可）和同一標本可直接重復染色的優(yōu)點是革蘭染色、美藍染色和姬姆薩染色所不具備的。在快速診斷新生兒淋菌性眼炎時有一個值得重視的問題，這就是患兒家長的病史采集（主要是指婚外），尤其是男方有婚外，而女方不知情的情況下，要追問病史并注意方法，及時診斷輕癥或無癥狀的淋病患者，并對配偶及同時治療，是避免重復感染的有效辦法。由于耐藥菌株的出現，新生兒淋菌性眼炎最好住院治療，以便觀察治療效果（并做眼分泌物涂片染色監(jiān)測），必要時可請眼科會診。

有專家認為，預防新生兒淋菌性眼炎最有效的方法是對感染的孕婦給予產前治療，新生兒生后1小時內給予0.5%的紅霉素膏涂眼，最好應用一次性藥（膏）水，但眼藥水預防新生兒淋菌性眼炎的有效率尚未肯定，并且無法清除鼻咽部的菌群[7]。值得注意的是，在開始靜脈應用抗生素治療的最初24小時內隔離新生兒，由于分泌物有很強的傳染性，要遵循嚴格的洗手技術，還要立即用無菌等張生理鹽水沖洗雙眼（每1～2小時1次）直至洗凈；當使用推薦的抗生素進行全身治療時，不必再應用局部抗生素治療[6]。

總之，通過上述臨床應用研究結果表明，在快速診斷新生兒淋菌性眼炎時，TF染色具有較強的實用價值，而新生兒淋菌性眼炎的快速診斷和及時治療對減少其并發(fā)癥以及該病的預后均起重要作用。

參考文獻：

[1] 葉順章，張木有.性傳播疾病實驗診斷手冊[M].廣州:廣東科技出版社，1991.21.

[2] 喻 強.TF染色法診斷滴蟲性陰道炎的研究[J].中華醫(yī)學雜志，1990，70（3）：175.

[3] 喻 強.TF染色法檢出一株多分裂陰道毛滴蟲[J].實用醫(yī)學雜志，1991，8（1）：52.

[4] 喻 強.TF染色法在常規(guī)血片快速染色中的應用[J].實用醫(yī)學雜志，1991，7（2）：97.

[5] 喻 強.應用TF染色進行形態(tài)學觀察[J].陜西醫(yī)學檢驗，1993，8（3）：166.

[6] 魏克倫，楊于嘉.新生兒手冊[M].第五版.第一版.長沙：湖南科學技術出版社，2006.270.

篇5

關鍵詞：骨髓檢驗報告；教學方法；探討

【中圖分類號】G640

骨髓檢驗報告的書寫是醫(yī)學檢驗專業(yè)學生《血液學檢驗》課程中非常重要的內容之一，在常見貧血、白血病等血液病的診斷、協(xié)助診斷和療效觀察過程中，臨床醫(yī)師需要反復抽取患者的骨髓送血液科進行骨髓檢查，每次檢查后檢驗醫(yī)師都要填寫骨髓檢驗報告，供臨床醫(yī)師診斷疾病，觀察療效，直到患者病情完全緩解出院為止。因此，骨髓檢驗報告單的填寫質量要求非常高，一份良好的骨髓檢驗報告單是骨髓細胞特征的全部再現，是檢驗醫(yī)師骨髓檢驗技術和對臨床資料綜合分析能力的高度體現，檢驗醫(yī)師不僅需要較強的識別骨髓細胞形態(tài)的能力，寫一份合格的骨髓檢驗報告更重要。學生在學習過程中，對骨髓檢驗報告的書寫常感到非常困難，為了上好這一課，筆者在多年的教學過程中，積極探索，結合學生實際與臨床實際，對骨髓檢驗報告單的書寫探索出了一套較好的教學方法，能使學生在較短的教學時間里寫好一份骨髓檢驗報告，并讓學生通過骨髓檢驗報告單的書寫，全面熟悉、掌握貧血及白血病等常見血液病的血象及骨髓象特征，學會分析骨髓象，掌握相關骨髓檢驗技術，并正確為常見血液病下診斷。現將教學方法交流如下。

1.總結出一套骨髓檢驗報告基本書寫模板，要求學生根據所檢驗的血液病的血象和骨髓象特征，按照模板認真填寫

根據教材及臨床實際，骨髓檢驗報告單的書寫具有一定規(guī)律，但對初學者學生來說，要寫好一份骨髓檢驗報告單確是一件非常困難的事，為了讓學生在課時數少的情況下盡快掌握書寫技巧，筆者為學生總結出了一套骨髓檢驗報告單書寫基本模板，供學生參考，要求學生按照模板要求認真分析骨髓象，填寫不缺項。這樣做可以幫助學生理清思路，有計劃、有條理地去分析骨髓象，書寫報告單，減少了學生走彎路的時間。

1.1一般情況下骨髓象書寫基本格式

①取材滿意、涂片染色良好。

②骨髓有核細胞增生程度，粒紅比值。

③粒系細胞增生程度，所占比值，以哪1-2階段的細胞為主，各階段細胞形態(tài)特征。

④紅系細胞增生程度，所占比值，以哪1-2階段的細胞為主，各階段細胞形態(tài)特征。成熟紅細胞形態(tài)特點。

⑤淋巴細胞及單核細胞比值、形態(tài)特征。

⑥全片見到巨核細胞多少個，以哪1-2階段細胞為主，各階段細胞形態(tài)特點。血小板分布及形態(tài)特點。

⑦全片未見寄生蟲及其他異常細胞。

1.2常見貧血的骨髓象書寫格式

在報告基本格式的基礎上，把“4、與3、”對換位置，并要求學生要特別重點描述幼紅細胞形態(tài)改變，以及成熟紅細胞形態(tài)改變特點，因為不同的貧血，幼紅細胞和成熟紅細胞形態(tài)都會出現不同的形態(tài)改變，這樣有助于貧血的分類和診斷。

1.3常見白血病的骨髓象書寫格式

在報告基本格式的基礎上，根據白血病發(fā)生在哪個系，就將哪個系的白血病細胞改變情況放在第3條描寫，第2條不用填寫粒紅比值，未發(fā)生白血病改變的其他系細胞受抑制。

例如，急性淋巴細胞白血病L1書寫格式：

①取材滿意、涂片染色良好。

②骨髓有核細胞增生極度活躍。

③淋巴系細胞增生極度活躍，以原始淋巴細胞為主，占65%，幼稚淋巴細胞占29%，原始淋巴細胞和幼稚淋巴細胞以小細胞為主，大小較一致，核型規(guī)則，細胞核染色質較粗，核仁1-2個，不太清楚，胞漿量少，退化細胞較多。

④紅系及粒系細胞受抑制，細胞形態(tài)基本正常。

⑤全片見巨核細胞2個，血小板少見，形態(tài)基本正常。

⑥全片未見寄生蟲及其他異常細胞。

2.認真批改學生寫的骨髓檢驗報告，找出問題，并及時在課堂上講評，指導學生及時糾正錯誤

一般情況下，就算是照著模板寫報告，學生前幾次所寫的報告都會出現不少問題。如，常有一些學生在報告中沒有描述成熟紅細胞形態(tài)特點，血小板分布和形態(tài)，出現粒紅比值計算結果錯誤，忽略第一條“取材滿意、涂片染色良好”及最后一條“全片未見寄生蟲及其他異常細胞”等。也會出現不知怎樣描述異常幼紅細胞形態(tài)特點和白血病細胞形態(tài)特點，難下診斷等問題。還會在報告文字描述中用一些口水話，寫錯字、涂改字等。因此，每次學生交來的骨髓檢驗報告，筆者都會認真批改，在報告上注明錯誤的地方，并把正確的答案也批在報告上。然后統(tǒng)計分析學生出現哪些問題，某種問題出現人數有多少等情況。在下一次的課堂上，筆者就會針對學生出現的問題一一講評，對學生每一次的進步都給予表揚。而且，每一次講評都做到講深講透。

2.1骨髓檢驗報告中學生問題分析：

2.1.1不填取材滿意、涂片染色良好

這一條有的學生會不寫，他們認為沒必要，但筆者要求一定要寫。因為這一條包含的意義在于檢驗醫(yī)師應該首先檢查臨床醫(yī)師送檢的骨髓片是否是成功抽取的骨髓涂片，如果取材滿意，才有對骨髓象進行分析的價值。隨后檢驗醫(yī)師對骨髓涂片要進行瑞特染色，染色良好的片子，骨髓細胞形態(tài)才好識別，才能有效分類骨髓細胞。因此，這一條的書寫，可提醒學生要重視以上問題，對初學者來說是必須的。

2.1.2粒紅比值算錯

粒紅比值是指檢驗醫(yī)師所分類的骨髓細胞中全部粒系細胞數除以全部紅系細胞數所得的值，這個值可以反映骨髓中粒系細胞和紅系細胞所占比例是否在正常范圍，表達方式以正常骨髓粒紅比值為例，粒：紅=2-4：1，有的同學會寫成粒紅比值1：2-4，這樣一來，意義就完全不同了，一般是學生粗心大意和理解錯誤的結果，必須給予糾正，并說明道理。

2.1.3漏填成熟紅細胞形態(tài)特點

成熟紅細胞形態(tài)變化，在常見貧血的診斷中具有較大意義，不同的貧血，成熟紅細胞形態(tài)會發(fā)生不同的改變。如巨幼細胞性貧血，骨髓象中成熟紅細胞大小不均，以大細胞為主，紅細胞中央淡染區(qū)不明顯。因此，要求學生一定要重視成熟紅細胞形態(tài)描述。

2.1.4漏填血小板分布及形態(tài)特點

血小板數量的減少、形態(tài)的異常，會影響機體止血和凝血的功能，導致機體組織、器官、粘膜容易出血，或出血不止。如再生障礙性貧血和常見白血病等患者的骨髓中一般會出現不同程度的血小板減少，或形態(tài)異常，檢驗醫(yī)師對骨髓中血小板分布情況和形態(tài)改變的描述，可為臨床醫(yī)師提供患者出血原因，出血程度分析等參考依據，因此也很重要，要求學生不能省略或遺漏。

2.1.5忽略全片未見寄生蟲及其他異常細胞

有些寄生蟲病如瘧疾、弓形蟲病等，在骨髓中可發(fā)現相應的蟲體或寄生蟲滋養(yǎng)體等，如果是血液病合并寄生蟲感染患者，發(fā)現寄生蟲就可為臨床醫(yī)師提供有價值的診斷依據。

有些血液病可在骨髓中發(fā)現特殊異常細胞及病理細胞，如骨髓癌轉移、戈謝病、尼曼匹克病等，如在骨髓中發(fā)現異常的癌細胞、特殊形態(tài)的戈謝細胞及尼曼匹克細胞，對相應的疾病有絕對的診斷意義。因此，寫這一條，更重要的是提醒大家在觀察分析骨髓象時要同時注意觀察骨髓中是否存在寄生蟲，是否存在特殊異常細胞，不管有沒有，都要給臨床醫(yī)師一個明確的回答。

2.1.6異常幼紅細胞形態(tài)特點和白血病細胞形態(tài)特點描述不清

出現這個問題主要有兩個方面的原因：一是學生識別細胞能力不足，二是沒有掌握相關血液病的骨髓象特征，看不出特點，抓不住重點，不知該怎樣描述。針對這個問題，筆者便結合相應血液病骨髓象進行認真分析，如典型的缺鐵性貧血骨髓象幼紅細胞改變特點為，幼紅細胞胞體小，胞漿量少，胞漿邊緣不整齊、嗜堿性，中晚幼紅細胞核染色質濃縮、深染。同時加強骨髓細胞形態(tài)學改變投影演示、版圖描繪、顯微鏡下指導，提高學生識別骨髓細胞能力及對血液病骨髓象特征掌握程度。

2.1.7正確下診斷困難

每一份骨髓檢驗報告都需要下一個診斷意見，為臨床醫(yī)師提出細胞學診斷意見或可供臨床參考的意見。骨髓檢查診斷疾病的性質一般分為明確診斷、符合診斷、提示性診斷和排出性診斷等，不同的血液病應該以不同的方式下不同的診斷，這需要檢驗人員具有較高的檢驗技術、較豐富的臨床知識、以及將檢驗結果與臨床資料相結合綜合分析的能力。對于初學者學生來說，確實有一定困難。如巨幼細胞性貧血、各種白血病，通過骨髓檢查可作出明確性診斷，缺鐵性貧血只能做出符合性診斷等。但通過反復實驗、修改報告，反復講解相應血液病的診斷要點后，學生可以基本掌握常見血液病的診斷方法。

2.1.8在報告文字描述中用一些口水話，寫錯字、涂改字

骨髓檢驗報告要求內容簡明扼要，突出重點，使用書面、專業(yè)語言，而且不能有任何涂改痕跡，因此對學生報告中出現口水話、寫錯字、涂改字等現象，筆者要求一定要改正，要求學生反復書寫、反復修改報告，直到滿意為止。并將實驗報告作為平時成績，納入學期考試總成績。

3.特別講解常用化學染色在常見血液病的診斷中的重要作用

常用化學染色有過氧化物酶染色（POX）、特異性酯酶染色（SE）、非特異性酯酶染色（α-NAE）及氟化鈉抑制實驗，鐵染色等。如POX、SE和α-NAE及氟化鈉抑制實驗對常見急性白血?。毙粤＜毎籽?、急性單核細胞白血病、急性淋巴細胞白血?。┑蔫b別具有重要意義；鐵染色，對缺鐵性貧血診斷具有重要意義等。因此，要求學生在骨髓檢驗報告單中，做了化學染色的，必須填寫化學染色結果。

4.強調血片檢查在骨髓檢驗中的作用

許多血液病不僅骨髓象發(fā)生改變，而且血象也有相應改變。如常見急性白血病，不僅骨髓象可見到大量原始、幼稚白血病細胞，血片中也可查到大量一般絕對見不到的異常原始、幼稚細胞。因此，血涂片的檢查和描寫對血液病的診斷也很重要，學生也需要重視。

骨髓檢驗報告主要包括以下幾部分的內容：骨髓象、血象、細胞化學染色結果、診斷意見及建議。筆者通過以上幾個方面的反復教學，學生可在畢業(yè)前基本掌握常見血液病的骨髓檢驗報告書寫方法，并正確下診斷，為學生將來服務社會奠定了良好基礎。

參考文獻：

篇6

［關鍵詞］根尖封閉；Cortisomol糊劑；染料滲入法；微滲漏

根管充填是根管治療中最重要的一步，其目的是封閉根管系統(tǒng)，尤其是根尖1/3，以防止細菌進入造成根管的再感染。而糊劑的使用是根尖封閉質量的關鍵［1］。據統(tǒng)計，根管治療失敗有近60%是由于根管封閉不完全造成的［2］。因而研究者一直都在尋找理想的根管充填材料和方法以徹底封閉根管系統(tǒng)。Cortisomol是目前國外常用的一種根管充填材料，現在國內也開始使用，關于其減輕根尖術后的疼痛及對治療牙髓和根尖周病有較好的療效［3］已有報導，而其對根尖孔的封閉能力報導較少。本實驗通過染料滲入法將Cortisomol糊劑與傳統(tǒng)的氧化鋅丁香油糊劑對根尖孔的封閉性能作對比研究。

1材料與方法

1.1材料Cortisomol根管糊劑（法國碧藍公司生產），粉由1.1%醋酸強的松龍鹽、多聚甲醛、氧化鋅、紅色氧化劑及賦形劑等組成，液為丁香油，應用方法為粉液調拌；氧化鋅丁香油糊劑（上海齒科材料廠生產），其主要成份為氧化鋅和丁香油，使用時兩者調拌而成；牙膠尖（廣東協(xié)禾醫(yī)藥有限公司生產）。

1.2方法

1.2.1樣本收集和分組收集離體單根管恒牙44顆，要求牙體完整，牙根長度近似。超聲波去除牙面肉芽和結石，10%福爾馬林液浸。

1.2.2根管預備和充填將以上所有牙均用金鋼砂片于釉牙骨質交界處切除牙冠，拔除根髓后測量并記錄根管工作長度（根管口至根尖孔上方1旁mm處的距離），用K型根管銼按常規(guī)法清理并擴大根管至40#，3%過氧化氫液和生理鹽水交替反復沖洗根管后吸干。采用冷側壓法按測量好的工作長度進行根充，陰性和陽性對照組根管僅充填牙膠尖；A、B組各20顆分別用Cortisomol糊劑和氧化鋅丁香油糊劑加牙膠尖充填根管，拍X片證實充填良好后，將以上各牙根管口用磷酸鋅粘固粉封閉。

1.2.3染色和微滲漏的測量將以上所有樣本置于37℃、100%濕度孵箱內8d，待根充材料凝固后，取出吹干，陽性對照組根面不涂指甲油，陰性對照組為整個牙根包括根尖孔涂布2層指甲油，A、B組為在距離根尖孔2mm以上根面均勻涂布2層指甲油，靜置24h。將牙根垂直懸吊浸入6mm深1%亞甲藍液中浸泡6d，取出牙根，流水洗凈吹干，將牙根沿長軸縱形剖開。在帶有目微尺的光學顯微鏡（×50）下，測量染液自根尖孔向冠方滲入的距離（精確到0.01mm），以雙側長度的平均值作為最后測得值并記錄。對測量結果通過SPSS統(tǒng)計軟件作統(tǒng)計學分析，采用t檢驗。以上操作均由1人完成。

2結果

陽性對照組染色距離均為6mm以上；陰性對照組染液滲入距離為0；Cortisomol糊劑組平均微滲漏距離為1.21mm；而氧化鋅丁香油糊劑組為2.17mm。經均數的顯著性t值檢驗，P<0.01，兩組滲漏值有顯著性差異。兩種根充糊劑的微滲漏結果見表1。

3討論

根充材料的主要作用是提供根尖封閉，以防止細菌的侵入和細菌產物從根管系統(tǒng)擴散進入到根尖周組織［4］。理想的根充材料應該具有易操作、阻射、體積穩(wěn)定、不被吸收、對溫度不敏感及能粘附于牙本質，無毒，生物相容性好等特點［5］。影響根充材料封閉效能的因素很多，除了與根管壁的清潔度濕度根管預備狀況有關外，最重要的因素還是材料的理化性能。臨床上選用何種材料作封閉劑，一般是基于材料的封閉性能以及材料的生物相容性兩方面考慮。本實驗通過國外常用的Cortisomol糊劑與傳統(tǒng)的氧化鋅丁香油糊劑采用美藍染色法對其根尖孔的封閉能力進行對比研究。結果陽性對照組美藍滲入明顯，說明亞甲藍有良好的滲透和染色作用，陰性對照組無美藍滲入，表明本實驗所用保護劑封閉能力良好，從而保證該實驗的可靠性。超級秘書網

Cortisomol糊劑與氧化鋅丁香油糊劑同屬氧化鋅類根管封閉劑，已知氧化鋅不溶于水，顆粒細?。?lt;200目），流動性好凝固時間長（24h），具有一定的X線阻射力，因而其根尖封閉效能頗佳。它是目前臨床應用最廣泛的根充糊劑，療效肯定，以它作對照組對于評價一種新的根充糊劑是合適的。Cortisomol根充材料主要含1.1%醋酸強的松龍鹽、多聚甲醛、氧化鋅、紅色氧化劑及賦形劑，其工作時間為30min，凝固時間2~6h，溶解度≤3%。同國內常用的氧化鋅丁香油糊劑相比，主要增加了醋酸強的松龍鹽和賦形劑成份。醋酸強的松龍為糖皮質類激素，根管內用藥可減輕根充術后根尖周圍的腫脹和疼痛；多聚甲醛可使根尖殘留的牙髓組織干燥硬化和消毒根管；紅色氧化劑便于清楚操作；而其賦形劑可增強糊劑與根管壁的粘附，從而增強糊劑封閉根尖孔的能力。Cortisomol根管糊劑不可吸收，吸水性小，能長期固定在根管中［7］，也可防止因微滲漏引起的根尖周炎的復發(fā)。從以上兩組實驗結果也說明了Cortisomol糊劑對根尖孔的封閉性能優(yōu)于氧化鋅丁香油糊劑?？梢奀ortisomol這種新型的根管糊劑具有止痛、根管消毒、減輕炎癥反應［7］和根管封閉性能好等多種作用，是一種較理想的根管充填劑。

參考文獻

［1］YareGM,BouDagherBF.Sealingabilityofthevericalcondensationwithdifferentrootcanalsealers［J］.JEndodontics,1996，22（1）∶6

［2］MartinCL,LuqueF,RodrigueaG,etal.JEndod,2002,28(6)∶423-426

［3］常世民，韓培彥，邢汝東，等.CORTISOMOL根管糊劑根充術后反應的近期療效觀察［J］.臨床和實驗醫(yī)學雜志,2004，3（1）∶19

［4］FogelHM,PeikoffMD.Microleakageofroot-endfillingmaterials［J］.JEndodon,2001,27∶456-458

［5］劉敏川綜述，鄧惠妹審校.根管充填方法的現狀述評［J］.國外醫(yī)學，1995，22（5）∶285

篇7

【論文摘要】近年來分子生物學技術以及其它高、新技術在病理領域得到廣泛的應用，同樣作為體育界的基礎研究學科運動人體科學的發(fā)展已經不能滿足簡單的宏觀的研究，越來越多的醫(yī)學檢驗以及病理學實驗技術在運動人體科學廣泛應用，尤其是組織病理學技術中定位技術，例如免疫組化、原位雜交等。本文就以上三種病理學常用的定位技術的方法進行綜述。

1免疫組織化學實驗技術

隨著免疫組織化學染色技術的廣泛應用，病理學研究產生了劃時代的飛躍。免疫組織化學是病理學實驗中常用的方法，是在蛋白質水平用各種特異性抗體檢測細胞內各種抗原物質。根據標記物的不同，免疫組織化學技術可分為免疫熒光細胞化學技術、免疫酶細胞化學技術、免疫鐵蛋白技術、免疫金-銀細胞化學技術、親和免疫細胞化學技術、免疫電子顯微鏡技術等。

1.1免疫組織化學實驗步驟免疫組化技術是在組織化學的方法上結合免疫學的理論和技術發(fā)展起來的一門新技術。其原理是利用免疫學的核心——抗原體特異性結合的原理，用標記抗體追蹤抗原，通過化學反應使標記于結合后的特異性抗體上的顯示劑，如酶、金屬離子、同位素等顯示一定的顏色，并借助顯微鏡、熒光顯微鏡、電鏡對其顏色進行觀察，以達到檢測抗原物的目的[1]。

1.2免疫組化技術的優(yōu)點免疫組化技術的優(yōu)點：①特異性強，免疫組化中抗體與組織細胞中的抗原的結合是特異的。如白細胞共同抗原（LCA）顯示淋巴細胞成分。②敏感性高，而今，由于抗生物素—生物素（ABC）法和鏈酶素—過氧化物酶連接（SP）法的出現，使抗體的稀釋度(代表敏感度)達到了上千、上萬，甚至上億倍，使免疫組化技術更加可靠。③定位準確，由于抗原抗體的結合是特異的，因而免疫組化技術可在組織和細胞內準確定位，對不同抗原在同一組織或細胞中進行定位觀察，將形態(tài)與功能相結合，對疾病進行深入的研究。

2原位雜交實驗技術

原位雜交是將組織化學與分子生物學技術結合來檢測合定位核酸的技術。它是用一段已知序列的核苷酸片斷來檢測細胞內是否存在欲檢測物質的DNA或RNA，是比免疫組化更加靈敏而深入一個層次的檢驗方法。根據所選探針和待測靶序列的不同，核酸原位雜交有DNA-DNA雜交、DNA-RNA雜交、RNA-RNA雜交等。

2.1原位雜交技術的應用原位雜交由于不需要從待測組織中提取核酸，可完好的保存組織、細胞的形態(tài)結構，將形態(tài)學與基因功能活動的變化相結合進行多層面的研究。主要應用：①細胞特異性mRNA轉錄的定位可用于基因圖譜、基因表達和基因組進化的研究；②感染組織病毒DNA/RNA的檢測和定位；③癌基因、抑癌基因及各種功能基因在轉錄水平的表達及其變化的監(jiān)測；④基因在染色體上的定位；⑤檢測染色體的變化；⑥間期細胞遺傳學的研究。

2.2原位雜交技術與免疫組化的比較

2.2.1兩者的區(qū)別原位雜交與免疫組化染色技術相比較，這兩種方法的共同之處均具有定位檢測的功能，且均有較高的敏感性和特異性，所不同的是免疫組化染色是用的是抗體，其檢測對象是抗原，機制是抗原-抗體的特異性結合，是蛋白質表達水平的檢測；原位雜交使用的是探針，遵循堿基互補配對的原則與待測靶序列結合，是DNA或mRNA水平的檢測。從實驗方法來看，免疫組化染色操作相對簡單，成本相對較低，受外界因素的影響相對?。辉浑s交技術無論從實驗設計上，還是從實際操作上均較免疫組化染色復雜，成本的高低與試劑的種類和來源密切相關。一般而言，直接選用商品化的標記探測和檢測試劑盒的實驗成本較高；熒光標記探針較非熒光標記探針的成本高，對樣本及實驗條件的要求較高，也更容易受到外界因素的影響。

2.2.2免疫組化與原位雜交雙標技術雙標技術是在同一張組織切片上標記兩種不同的抗體或同時應用兩種不同的檢測手段，如免疫組化和原位雜交技術，在不同層次來檢測同一細胞上某些物質的表達是否有相關性的一種實驗方法。與傳統(tǒng)的單項檢測相比，雙標記具有無可比擬的優(yōu)越性，可以克服由于切片間各種差異而引起的時間或空間的樣本誤差。實驗方法上先進行原位雜交會減少免疫組化過程中對待測DNA或RNA的破壞或影響，一般目前均推薦先進行原位雜交后進行免疫組化標記[2，3]。具體的操作跟單純的免疫組化和原位雜交各自的方法一致。需要注意的問題就是：①所用的實驗設備必須經DEPC水浸泡或200℃烤箱過夜，操作時須帶口罩及手套；②當雜交步驟完成后，切片必須認真浸泡及長時間洗滌至少超過30min。③作免疫組化的各步驟時間均須適當延長，以增加抗原抗體間的結合，楊青春等人研究發(fā)現每個步驟均延長2～3倍時間。④免疫組化顯色后不需要用蘇木精復染，以免遮蓋核信號。

參考文獻

[1]紀小龍，施作霖.診斷免疫組織化學[M].北京：軍事醫(yī)學科學出版社，1997.5.

篇8

【關鍵詞】 胃癌；癌前病變；診斷；染色內鏡檢查；胃鏡

胃癌（gastric carcinoma）是最常見的消化系統(tǒng)惡性腫瘤， 在我國惡性腫瘤中排第二位[1]。我國新發(fā)胃癌病例占全球新發(fā)病例的40%以上， 并且大部分已處于進展期， 手術及化療效果不佳[2]。因此早期診斷胃癌及癌前病變具有重要的臨床意義， 胃鏡檢查在確定早期胃癌及癌前病變中具有重要價值。近年來隨著內鏡技術的普及和各種內鏡下方法的開展， 內鏡已經成為診斷消化道腫瘤的首選方法， 電子染色內鏡是近年來發(fā)明的內鏡方法， 為了探討電子染色內鏡下診斷胃癌及癌前期病變的臨床價值， 作者經過多年臨床研究， 取得了滿意的結果， 現總結報告如下。

1 資料與方法

1. 1 一般資料 選取2012年1月～2014年1月在本院進行診治的內鏡下黏膜異常的240例檢查者。納入標準：①所有檢查者均進行胃鏡活檢；②檢查前未行放化療和免疫治療；③自愿納入本研究者 。觀察組108例予以染色后活檢，對照組132例單純活檢。觀察組108例中男70例， 女38例；年齡32～80歲， 平均年齡（55.48±12.39）歲。對照組132例中男79例， 女53例；年齡33～81歲， 平均年齡（56.79±11.45）歲。兩組檢查者的性別、年齡等一般資料差異無統(tǒng)計學差異（P>0.05）， 具有可比性。

1. 2 方法 兩組檢查者均進行常規(guī)胃鏡的準備與操作， 檢查前常規(guī)用咽部、一般情況告知、擺放， 檢查前除準備常規(guī)胃鏡下治療器械外， 需禁食水6 h。完善血常規(guī)、血型、出凝血時間、肝腎功能等治療。麻醉前麻醉師、內鏡操作醫(yī)師、護理人員均需要詳細了解病史， 注意有無禁忌證及物過敏史。有休克癥狀者檢查前糾正休克。測量血壓、脈搏、呼吸， 發(fā)現異常及時處理。如有假牙應取下， 以防窒息[5]。插鏡過程中保持患者頭部位置不動， 應密切觀察檢查者的反應， 當胃鏡到達咽喉部時， 囑患者做吞咽動作， 以助胃鏡通過咽喉部， 但不可將唾液咽下， 以免嗆咳， 如有嗆咳， 說明可能有唾液流入氣管， 應將患者的左嘴角輕輕下壓， 協(xié)助患者將唾液排出。當檢查者出現惡心不適時， 應告知檢查者深呼吸， 放松全身肌肉。觀察組用清水將病變部位及周圍胃黏膜沖洗干凈后，經活檢孔插入噴灑管，將配制的0.5%盧戈氏靛胭液均勻噴灑于病變黏膜，0.5 h后，于著色區(qū)域行胃黏膜活檢并進行病理組織學檢查。對照組直接鉗取胃黏膜行活檢。

2 結果

觀察組108例檢查者中， 病檢證實有腸上皮化生46例，不典型增生30例，早期胃癌8例（均經手術及術后標本病理檢查證實限于黏膜層且無淋巴結轉移）。對照組檢查者中，病變組織病理檢查顯示：腸上皮化生34例，不典型增生20例，未檢出早期胃癌。觀察組癌前病變和早期胃癌共檢出84例，檢出率77.78%（84/108）；對照組癌前病變和早期胃癌共檢出54例，檢出率40.91%（54/132）。統(tǒng)計學檢驗差異有統(tǒng)計學意義（P

3 討論

胃癌是消化系統(tǒng)最常見惡性腫瘤， 在惡性腫瘤中排第二位， 病死率排第三位， 大部分患者發(fā)現胃癌并采取治療措施時已經處于晚期狀態(tài)， 治療效果不佳。目前， 胃癌的治療是以手術為主、放化療等治療為輔的綜合治療， 雖然隨著醫(yī)療技術的發(fā)展， 胃癌的手術切除率不斷得到提高， 但是其術后復發(fā)率高、死亡率仍然是醫(yī)生經常面臨的問題[3]。因此如何采取積極的措施早期診斷胃癌及癌前病變具有深遠的意義。

內鏡是近代醫(yī)學史中一種重要的診斷和治療器械。隨著科技的進步， 內鏡已從原來單一的診斷功能發(fā)展到借助高頻電刀、氬氣、微波、激光等手段來摘除、電凝人體的贅生物以及直接進入腔內止血等為目的的治療性內鏡。目前外科正逐步形成以內鏡為治療工具的“微創(chuàng)外科學”[4]。

胃鏡檢查是臨床常用的檢查手術， 胃鏡診療技術目的通過胃鏡檢查直視胃部疾病， 以確定病變的部位及性質， 取活體組織檢查以協(xié)助診斷。臨床適應證包括上消化道癥狀， 需做檢查以確診者；不明原因上消化道出血者；疑上消化道腫瘤者；需隨診的病變， 如潰瘍病、萎縮性胃炎、息肉病等。但臨床操作中也要注意禁忌證， 比如有嚴重心臟病、嚴重肺部疾病、上消化道大出血生命體征不穩(wěn)者、精神不正常不能配合檢查者、咽部急性炎癥者、明顯主動脈瘤、腐蝕性食管炎急性期或者疑有胃腸穿孔者[5]。

本研究采用電子染色內鏡檢查作為觀察組研究方式， 此方法是通過內鏡將色素噴灑在胃黏膜上， 作內鏡檢查， 稱染色內鏡， 通過本研究發(fā)現， 觀察組癌前病變和早期胃癌共檢出84例，檢出率77.78%（84/108）；對照組癌前病變和早期胃癌共檢出54例，檢出率40.90%（54/132）。統(tǒng)計學檢驗差異有統(tǒng)計學意義（P

綜上所述， 盡管染色內鏡可很大程度上提高早期胃癌和胃黏膜不典型增生的診斷率， 但常規(guī)活檢因取材部位及深度等原因， 還是有一定的漏診率， 黏膜下層的整個病灶， 并進行病理學檢查， 彌補了常規(guī)活檢的不足， 減少漏診率。因此， 對于有經驗內鏡醫(yī)師診斷的早期胃癌， 進行染色內鏡并行完整病理活檢對于診斷早期胃癌有重要意義。

參考文獻

[1] Areia M， Amaro P， Dinis-Ribeiro M， et al. External validation of a classification for methylene blue magnification chromoendoscopy in premalignant gastric lesions. Gastrointeet Endosc， 2008，67（7）：1011-1018.

[2] 陳麗娜，吳云林.內鏡染色在早期胃癌診斷中的應用.上海交通大學學報（醫(yī)學版）， 2007，27（5）：613-616.

[3] Yamamoto H.Technology insight：endoscopic submucosal dissection of gastrointestinal neoplasms.Nat Clin Pract Gastroenterol Hepatol， 2007， 4（9）：511-520.

[4] 陸文曉，焦建華，王亞. 染色內鏡對提高早期胃癌及癌前病變檢出率的影響. 中國誤診學雜志. 2010，10（21）：5118-5119.

篇9

關鍵詞：胸腹水沉渣石蠟包埋；免疫組化；診斷

胸腹水是臨床上一種常見的并發(fā)癥，臨床上對其進行診斷時往往采用體液細胞學檢測法，但這種檢測方法的診斷率相對較低。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取于2013年9月～2015年9月我院各個科室送檢的胸腹水標本共260例。其中，患者的年齡41～79歲，平均年齡（56.67±3.29）歲。依據患者的臨床資料與標本的鏡下形態(tài)選取惡性及存在惡性傾向的體液標本共56例。

1.2方法

1.2.1切片制作方法 將選取的56例標本進行離心，然后舍棄上清液，吸取沉淀物后，將其制作成1張液基細胞涂片，采用濾紙將剩余的沉淀物進行包埋，包埋完成后進行組織學標號，并將其與組織標本放置于脫水機中，按照組織標本的制作方法對其進行固定、脫水、透明以及浸蠟，制成石蠟組織塊后，再將其制成3～4μm的切片。

1.2.2免疫組化染色方法 檢測方法使用Elivision法，抗體采用CEA、CK-H以及CKlow等，試劑采用福州邁新生物技術有限公司生產。染色方法具體如下：首先，將切片進行常規(guī)脫蠟至水，洗液采用PBS。然后，滴入3%的過氧化氫，于常溫下將其放置10min，并依據相關要求進行抗原修復操作，再滴入一抗，將其放置于4℃的冰箱中過夜。最后，向其滴入二抗，DAB顯色后，再采用蘇木素進行復染，并用鹽酸乙醇對其進行分化，并將切片脫水、封片。

1.3評價指標 陽性的評判標準主要包括三種，分別是：①CEA、D2-40以及Tg等部分腫瘤細胞的細胞質著色；②CK-H、CKlow、Calretin以及CA125腫瘤細胞的細胞膜著色；③Ki-67、TTF-1腫瘤細胞的細胞核著色。

1.4統(tǒng)計學方法 采取統(tǒng)計學軟件SPSS19.0對上述數據處理，計數采取率（%），組間率對比采取χ2檢驗，對比以P

2 結果

2.1兩種方法檢測胸腹水的檢出率比較分析 沉渣石蠟包埋聯(lián)合免疫組化檢測法檢出的陽性率為82.1%，高于液基細胞學檢測法，組間比較有差異（P

2.2免疫組化檢測法結果分析 沉渣石蠟包埋聯(lián)合免疫組化檢測法檢出的46例患者中，其中，表現為肺腺癌的患者共21例，表現為鱗癌的患者共10例，表現為卵巢癌的患者共4例，表現為胃腺癌的患者共9例，表現為間皮瘤的患者共2例。見表2。

3 討論

胸腹水脫落細胞學檢查是臨床上一種常用的檢測方法，該方法具有簡便、準確性高等特點，是臨床上診斷良惡性胸腹水的一種常用方法[1]。近幾年，隨著檢測技術的不斷發(fā)展，膜式超薄液基細胞學檢測技術以及沉渣石蠟包埋法已經廣泛應用于胸腹水細胞的涂片中，其中，采用沉渣石蠟包埋法制作切片，不僅可以提升切片的制作數量，保存細胞的完整性，提升臨床檢出率，同時還能夠對其進行免疫組化染色，在此基礎上還可以聯(lián)合使用抗體檢測，從而能夠對腫瘤細胞進行有效分類[2]。

目前，臨床上采用胸腹水脫落細胞學檢查時，診斷較為困難的是對間皮細胞與癌細胞的區(qū)分，特別是當間皮細胞退化后，由于不具有典型性，更易被誤診[3]。針對較難確診的患者，可以進一步采用免疫組化聯(lián)合抗體法進行檢查。臨床實踐中，我們依據單個抗體對不同的腫瘤細胞具有不同的特異性與敏感性的原理，在此基礎上，根據胸腹水沉渣石蠟包埋切片的結果選取相應的抗體，進而采用多種抗體進行聯(lián)合檢測[4]。目前，在胸腹水細胞學涂片中，我們常常采用Calretin、CK-H、CEA以及TTF-1四種抗體進行腫瘤的鑒別。其中，Calretin屬于一種鈣結合蛋白，該物質主要存在于人體的神經元以及其他細胞中，常見于間皮瘤中，而在腺癌中則較少見，因此，該物質可以作為惡性間皮瘤的標志物[5]；CK-H屬于一種高分子量的細胞角蛋白，往往在人體皮膚的基底細胞、棘層細胞以及部分前列腺基底細胞等細胞層均有所表達，既可以作為鱗癌與腺癌之間鑒別的標志物，同時還可以作為間皮瘤與腺癌之間鑒別的標志物[6]；CEA主要存在于人體各種腺皮上皮源性腫瘤中，特別是在各種腺癌細胞中廣泛存在，其中，該物質在人體的胃腸道腺癌中具有較高的陽性率，而在人體的體腔間皮細胞中則不存在，且在間皮瘤與增生性間皮細胞中呈現為不表達或者是低表達，因此，該物質是腺癌與間皮癌之間鑒別的重要標志[7]；TTF-1主要存在于原發(fā)性肺腺癌中，且對其具有較高的敏感性與特異性，因此，該物質可以作為原發(fā)性肺腺癌與轉移性肺腺癌之間鑒別的標志物，同時該物質對于肺原發(fā)性低分化腺癌與鱗癌也具有一定的鑒別價值[8]。臨床上采用CKlow、CK-H、CEA以及TTF-1一組抗體聯(lián)合應用作為鱗癌與腺癌的鑒別，同時還可以作為腫瘤細胞來源于肺臟的依據。Calretin呈現為陽性表達說明患者為間皮瘤間皮增生，但是對其良惡性的具體判斷還需依據患者腫瘤細胞的異型性、核分裂數等進行綜合判斷。CKlow與CK-H均呈現為陰性，但TTF-1呈現為陽性，則應該考慮患者為肺未分化癌。

綜上所述，在胸腹水沉渣石蠟包埋中聯(lián)合應用免疫組化進行檢查，能夠提升臨床檢出率，確定腫瘤細胞的來源及其發(fā)病部位，為臨床治療提供參考意見。

參考文獻：

[1]奉孝榮，陳莉，梁輝，等.胸腹水沉渣切片在脫落細胞學中的作用[J].西部醫(yī)學，2010，22（7）：1230-1231.

[2]黃金長，張功亮，郭廣秀，等.細胞塊石蠟包埋及免疫細胞化學染色技術在胸腹水細胞病理學診斷中的應用價值[J].實驗與檢驗醫(yī)學，2013，31（5）：489-490.

[3]朱利，劉雙元，馮君，等.胸腹水沉渣切片對腫瘤細胞診斷的意義[J].臨床和實驗醫(yī)學雜志，2011，10（13）：1037，1039.

[4]邢榮格，張曉玲，高遠，等.免疫組化聯(lián)合抗體在胸水析出物診斷中的應用[J].河北醫(yī)藥，2012，34（5）：710-711.

[5]翟輝霞，李文燦.免疫組化聯(lián)合抗體在胸腹水沉渣石蠟包埋病理診斷中的應用[J].衛(wèi)生職業(yè)教育，2014，32（4）：144-145.

[6]陳學敬，周立娟，曲楊，等.沉渣包埋聯(lián)合免疫組化在胸水轉移性肺腺癌與胸膜惡性間皮瘤鑒別診斷中的應用[J].診斷病理學雜志，2014，21（5）：263-266.

篇10

1資料與方法

1．1方法

1．1．1分離培養(yǎng)hBMSCs在志愿者髂前上棘抽取骨髓10mL。采集的骨髓用生理鹽水1∶1稀釋，密度為1．077g／L的淋巴細胞分離液2000r／min離心15min，收集白膜層，生理鹽水漂洗2次。以含10％FBS的L－DMEM作為完全培養(yǎng)液，以一定密度接種于75mL培養(yǎng)瓶中，置于37℃，5％CO2飽和濕度培養(yǎng)箱內培養(yǎng)，3d后換液去除非貼壁細胞，以后每2～3d換液1次，待細胞達80％融合時，用0．25％胰酶＋0．02％ED－TA消化，以1∶3的比例傳代培養(yǎng)。

1．1．2流式檢測hBMSCs表型hBMSCs用0．25％胰酶＋0．02％EDTA消化，1000r／min離心5min，生理鹽水洗滌，制備成1×106／mL單細胞懸液，分別加入熒光標記的鼠抗人CD34、CD29、CD105抗體，設置空白對照，避光冰育30min，生理鹽水洗滌3次后重懸細胞，上流式細胞儀檢測。

1．1．3鑒定hBMSCs多向分化潛能以4×103／cm2密度將第3代hBMSCs接種于6孔板，每孔2mL。（1）成脂誘導及鑒定：細胞達到完全融合后4d，實驗組加入脂肪誘導液（H－DMEM，10％FCS，0．5mmol／LIBMX，10μg／mL牛胰島素，0．2mmol／Lindomethacin，1μmol／L地塞米松）誘導3d，再用脂肪保持液（H－DMEM，10μg／mL牛胰島素，10％FCS）處理1d，循環(huán)3次，再用脂肪保持液處理2d。對照組加入含10％FCS的H－DMEM，每3天換液1次。2周后油紅O染色鑒定。（2）成骨誘導及鑒定：細胞達到60％～70％融合后，實驗組加入成骨細胞誘導液（OS，含1×10－7mol／L地塞米松，10mmol／L甘油磷酸鈉，50g／mL維生素C），對照組加入L－DMEM完全培養(yǎng)液，置培養(yǎng)箱中，每2天換液1次，第21天終止誘導。茜素紅S染色鑒定。

1．1．4分組處理hBMSCs采用0．25％胰酶＋0．02％EDTA消化hBMSCs，用不同輸注液制備單細胞懸液。根據輸注液不同分為生理鹽水組（9g／L氯化鈉注射液）、糖鹽組（50g／L葡萄糖氯化鈉注射液）、清蛋白組（含5％人血清蛋白的氯化鈉注射液）。分別在4℃和25℃溫度條件下置于不同時間點（0．5、1．0、2．0、4．0，6．0h）后進行以下檢測。（1）取90μL細胞懸液與10μL胎盤藍混勻，3min內計數活細胞（未染色）和死細胞（染色），測定細胞存活率。（2）另取1×106／mL細胞行流式細胞術檢測細胞表型CD34、CD29、CD105。（3）再將不同分組細胞懸液，1000r／min離心5min，采用含10％FBS的L－DMEM作為完全培養(yǎng)液，以1×103／mL密度接種于96孔板，每組設3個復孔，置于37℃，5％CO2飽和濕度培養(yǎng)箱培養(yǎng)7d。采用CCK－8在酶聯(lián)免疫檢測儀上測定450nm各孔波長吸光度（A）值，以時間為橫軸，A值為縱軸繪制生長曲線。

1．2統(tǒng)計學處理采用SPSS17．0進行數據分析，結果用x±s表示。采用t檢驗進行兩組均數間比較，采用單因素方差分析進行多組均數間比較，采用LSD最小顯著差數法進行均數間兩兩比較。P＜0．05表示差別有統(tǒng)計學意義。

2結果

2．1hBMSCs形態(tài)觀察原代hBMSCs貼壁后，呈圓形，散在分布。3d后完全換液，去除未貼壁細胞，可見少量分散短梭形貼壁細胞。第14天時，貼壁細胞融合成單層，細胞排列有明顯方向性，呈漩渦狀。見圖。

2．2hBMSCs的表型流式檢測第3代hBMSCs的表型發(fā)現，CD105陽性率98．7％，CD29陽性率97．7％，表達率極高；CD34陽性率為2．9％，表達呈陰性。

2．3hBMSCs分化能力鑒定hBMSCs成脂誘導2周后，光學顯微鏡下可見大量融合成串珠狀的圓形脂滴。油紅O染色可見被染成橙紅色的脂滴，顯示分離的hBMSCs可被誘導向脂肪細胞分化。成骨誘導3周，細胞逐漸融合，失去細胞結構，14d左右出現明顯鈣結節(jié)，茜素紅S染色后可見散在大量橘紅色鈣結節(jié)，顯示培養(yǎng)的hBMSCs可被誘導向成骨細胞分化。

2．4hBMSCs存活率檢測在5個時間點（0．5、1．0、2．0、4．0、6．0h）對保存在25℃、4℃的3個實驗組的細胞存活率檢測，結果見表1～2。結果顯示，糖鹽組細胞存活率最低，25℃保存4．0h時只有約10％細胞存活；而清蛋白組細胞存活率最高，25℃保存2．0h時清蛋白組細胞存活率仍可達90％，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0．05）。25℃和4℃條件下，保存0．5h時，生理鹽水組及清蛋白組細胞存活率都超過90％，隨著保存時間延長，各組細胞存活率逐漸下降。

2．5不同分組細胞表型檢測25℃和4℃條件下，在5個時間點（0．5、1．0、2．0、4．0、6．0h）對3個實驗組的細胞表型檢測，結果見表3～5。結果表明，不同輸注液、保存溫度及保存時間對細胞表型影響差異無統(tǒng)計學意義（P＞0．05）。

2．6細胞生長曲線測定將不同分組處理后的細胞，采用L－DMEM完全培養(yǎng)液重新接種培養(yǎng)，檢測細胞增殖能力，結果見圖2（見《國際檢驗醫(yī)學雜志》網站“論文附件”）。50g／L葡萄糖氯化鈉注射液組保存的細胞增殖能力最差，保存4h后細胞失去貼壁和生長能力（無細胞貼壁無法完成生長曲線）。5％人血清清蛋白氯化鈉注射液組細胞增殖能力比9g／L氯化鈉注射液組細胞增殖能力強。同一組細胞4℃條件下不同時間點的增殖能力比25℃條件下強。隨著保存時間延長，各組細胞增殖能力逐漸下降。

3討論

hBMSCs是來源于骨髓的間質干細胞，不僅能分化成肝細胞、膽管上皮細胞［4］、血管內皮細胞［5］、不同類型的皮膚細胞［6］、神經樣［7］細胞，還具有免疫調節(jié)、炎癥趨化等特性，使其在肝臟疾病、血管外科、燒傷整形外科及神經損傷等疾病治療中發(fā)揮越來越重要的作用。干細胞注射液從實驗室制備到運送至病房回輸給患者具有一定時空距離，特別是隨著異地移植病例的增多，如何有效地保存干細胞注射液，對于細胞移植的臨床應用非常重要。目前相關研究更多集中于將干細胞冷凍于－80℃或液氮等進行長期保存的探討［8－9］，有關短時保存條件對干細胞生存和生長影響的研究不多。本實驗探討了幾種臨床常用注射液在不同溫度下短時保存干細胞對細胞存活和增殖能力等狀況的影響。形態(tài)學觀察顯示，培養(yǎng)的細胞呈均一長梭形，輻射狀生長；流式細胞術檢測細胞表型顯示CD34表達陰性，CD29、CD105表達陽性；成脂誘導后出現大量脂滴，成骨誘導后出現鈣結節(jié)，表明該細胞確為hBMSCs。